高效液相色譜柱的正確使用包含:加裝保護柱,過濾流動相和樣品,凈化樣品,避免過高的柱壓,注意溫度和酸堿度,正確及時的沖洗等。
保護柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學“拉圾”同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物,盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口,進樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1,2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學污染,因此,加裝保護柱是必要的,特別是在分析中藥色譜柱,中成藥等復雜混合物和生物樣品時更是保護分析柱必不可少的措施。
流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成,原則上,所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應過濾,但在實際操作上應視具體情況而有所區(qū)別:當有機溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它超純水時,在能確保水和有機溶劑的質量且沒有受到污染時,過濾并無更多實際意義。
當樣品中含有對色譜柱有損害的化學成分,如產(chǎn)生永久性吸附的蛋白質,糖等有機分子和強吸附性物色譜柱質,以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團離子,在進樣前應盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質組分。
在液相色譜分析過程中,常常需要使用緩沖鹽來調解流動相的pH值,緩沖鹽的恰當選擇能夠改善分離效果和峰形,若是對緩沖鹽選擇和使用不當,對色譜柱可能造成一些影響。
緩沖鹽使用不當對色譜柱的影響及其正確使用方法。
我們可以從柱壓升高,柱效下降以及使化合物的保留時間發(fā)生變化等方面來分析原因:。
色譜柱(1)柱壓升高。
原因:緩沖鹽使用不當導致緩沖鹽析出,會堵塞色譜柱兩端的塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,阻礙流動相傳質,從而引起柱壓升高。
?。?)柱效下降。
原因:a)有些緩沖鹽會滲入到鍵合相的深處,損害硅膠基體,導致色譜柱鍵合相流失,柱床變松,柱效下降,b)凝結在鍵合相表面,使C18碳鏈難以舒展,對物質的保留能力下降,導致柱效下降,因此用過緩沖鹽后需要對色譜柱進行沖洗,水中緩沖鹽濃度較大時應特別引起注意。
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