手性色譜柱用于分析或制備手性化合物,分為正相和反相兩種類型,具體填料包括環(huán)糊精手性柱、纖維素衍生物手性柱和配體交換手性柱等不同種類。今天研創(chuàng)生物小編給大家介紹下使用手性色譜柱的注意事項。
1、在進行樣品檢測之前,務必仔細詢問寄樣人有關樣品可能含有的溶劑,若在工藝中使用丙酮、氯仿、DMF、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF等溶劑,則應盡量將樣品烘干。最好將樣品溶解在流動相中,并通過μm濾膜進行過濾。切勿使用強堿性物質作為流動相添加劑或溶解樣品,因為這可能會破壞手性柱填料中的硅膠成分。
2、當系統(tǒng)中或者色譜柱中含有高濃度的異丙醇或者乙醇時,由于它們的粘度較大,使用平衡色譜柱時需特別留意壓力的變化??梢赃x擇低流速進行平衡,待柱壓下降后再緩慢增加至所需的流速。
3、樣品檢測完成后,以100%無水異丙醇清洗色譜柱,在3小時內進行min級沖洗。使用100%無水乙醇時柱內壓力較高,因此不宜設置過快的流速,應在沖洗過程中留意壓力的變化。若壓力超過50bar,最好將流速調至min級,并可考慮延長沖洗時間。
4、絕大多數(shù)手性毛細管柱所使用的固定液是經(jīng)過環(huán)糊精改性處理的物質。環(huán)糊精連接到不同的官能團上后具有不同的極性,為了選擇合適的柱子,首先需明確您要制備的產(chǎn)物類型,再選用適合分離效果的環(huán)糊精固定液種類。
5、手性色譜柱的保存條件對于其使用壽命和分離效果至關重要。一般來說,色譜柱應存放在干燥、陰涼、通風良好的環(huán)境中,避免陽光直射和高溫。此外,長期未使用的色譜柱應定期活化,以保持其最佳性能。
6、在手性色譜柱的使用過程中,應避免劇烈的壓力波動,因為這可能會導致柱床塌陷,影響分離效果。因此,在啟動和關閉色譜系統(tǒng)時,應緩慢調整流速,確保壓力穩(wěn)定。
7、對于不同的樣品,可能需要調整色譜柱的溫度以獲得最佳的分離效果。一般來說,手性化合物的分離在較低的溫度下進行,但具體溫度應根據(jù)實驗需求進行調整。
8、最后,每次使用手性色譜柱后,應及時清潔并干燥,以防止殘留的樣品對下一次實驗造成影響。同時,建議定期更換色譜柱,以確保分離效果和實驗結果的準確性。
總之,使用手性色譜柱時需要注意多個方面,包括樣品的處理、色譜柱的保存和活化、操作過程中的壓力控制、溫度的調整以及色譜柱的清潔和更換等。只有在嚴格遵守這些注意事項的前提下,才能充分發(fā)揮手性色譜柱的優(yōu)勢,得到準確、可靠的實驗結果。