相信使用過(guò)液相色譜柱的小伙伴們都會(huì)出現(xiàn)這些的小問(wèn)題！

常規(guī)思維中，色譜柱上標(biāo)示的流向是不可改變的，每次使用都要遵循。可是，大家有沒(méi)有想過(guò)這個(gè)方向的作用是什么呢？為什么要標(biāo)示一個(gè)使用方向呢？

原因很簡(jiǎn)單：其實(shí)色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的，標(biāo)示方向的目的就是讓我們?cè)谑褂弥杏涀×鲃?dòng)相從哪個(gè)方向流入色譜柱，那么這個(gè)流入端就是最先污染端。這樣就為我們?nèi)蘸缶S護(hù)或再生色譜柱做了準(zhǔn)備，而我們需要遵循這個(gè)規(guī)定應(yīng)該在色譜柱開(kāi)始做樣后。

液相色譜柱作為比較昂貴的色譜耗材，也具有很多特性，如果不了解這些注意事項(xiàng)，一不留神就會(huì)用壞。

而且色譜柱的內(nèi)部保存的溶劑是十分重要的，溶劑一般應(yīng)具有低粘度、高純度、化學(xué)穩(wěn)定性好對(duì)樣品有合適的極性和良好的選擇性、與檢測(cè)器兼容性強(qiáng)、低毒等特征。所以色譜柱內(nèi)部保存著什么溶劑一定要知道并且清楚，為此使用前，一定要看色譜柱的說(shuō)明書(shū)，其中也包括說(shuō)明書(shū)上建議的維護(hù)保養(yǎng)規(guī)定。

柱子類(lèi)型不同，保存溶劑也會(huì)不一樣，具體要看說(shuō)明書(shū)。對(duì)于反相柱，一般用甲醇(乙腈)保存，也有用80%左右甲醇濃度的甲醇/水保存的。一般用流動(dòng)相平衡沖洗10-20個(gè)柱體積即可(注意：柱體積不等于空柱管體積，4.6x250mm的色譜柱空柱管體積是4.15ml，而柱體積只有約2.5ml)。

在接入色譜柱時(shí)，須先用合適的溶劑沖洗流路（包括流通閥、定量環(huán)和自動(dòng)進(jìn)樣器），部分溶劑（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷和四氫呋喃等強(qiáng)溶劑）會(huì)破壞涂覆型手性固定相的結(jié)構(gòu)，因此不得使用它們作為流動(dòng)相或溶劑溶解樣品。

由于液相色譜柱需要活化，且內(nèi)部保存的有機(jī)系具有揮發(fā)性，因此在使用前還是應(yīng)該用小流速的和色譜柱內(nèi)部相同的溶劑沖洗一定的時(shí)間。

不同的色譜柱會(huì)有不一樣的保存條件：例如研創(chuàng)的EnantioPak? R-C是鍵合型手性柱，正反相體系均適用，并且需要注意專(zhuān)柱專(zhuān)用，正相色譜柱在使用含酸/堿添加劑的正相流動(dòng)相后，需用正己烷/異丙醇=90/10沖洗色譜柱50 min，然后用正己烷/異丙醇=90/10封存；而反相色譜柱在使用含酸/堿添加劑的反相流動(dòng)相后，需用乙腈/水=90/10沖洗色譜柱50 min，然后用乙腈/水=90/10封存；使用含緩沖鹽流動(dòng)相后，需要用不含緩沖鹽同比例流動(dòng)相沖洗色譜柱30min，然后用乙腈/水=90/10封存。

此外，由于色譜柱內(nèi)部保存液具有揮發(fā)性，因此為了減少其揮發(fā)速度，可以添加5%-10%的水，這樣的話(huà)可以在一定程度上減少一些有機(jī)系的揮發(fā)。如果再增加一個(gè)保險(xiǎn)，可以在堵緊堵頭后，再用封口膜封起來(lái)。

比較臟的樣品分析，比如含蛋白的血液體液樣品、高糖的柿子等水果、以及色素含量高的樣品，嚴(yán)重的可以導(dǎo)致色譜柱完全堵死。這時(shí)候，可以將色譜柱前段的篩板拆卸，超聲清洗。

液相色譜柱的日常使用，除非樣品處理效果特別好，不然在一般情況下，保護(hù)柱對(duì)樣品分析效果不影響顯著的情況，色譜柱前段增加保護(hù)柱，并根據(jù)色譜柱增加保護(hù)柱之后柱壓的增幅，定期更換保護(hù)柱柱芯。

填裝色譜柱的技術(shù)會(huì)嚴(yán)格的要求，如果沒(méi)有專(zhuān)業(yè)的儀器和正確的操作方法是不建議自行裝柱的，要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。

異丙醇是一個(gè)非常好的作為中間步驟的溶劑，因?yàn)樗芘c正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶，但是異丙醇粘度非常大，必須確保較低的流速以免使泵壓過(guò)高。沖洗色譜柱時(shí)，沖洗液由色譜柱出液端直接接入廢液瓶，不能流經(jīng)檢測(cè)池，以避免檢測(cè)池被污染。