由于分析的樣品種類眾多,且樣品基質(zhì)復(fù)雜,色譜柱容易受到污染,這會導(dǎo)致柱壓增加和分離能力下降,通常有以下兩種情況。
1、直徑大于篩板孔徑的顆粒會堵塞在柱頭篩板上,從而容易導(dǎo)致柱壓升高。為了解決這個問題,可以在上樣之前使用針式濾器進(jìn)行過濾,常見的規(guī)格有0.22和0.45微米,您可以根據(jù)需要選擇合適的規(guī)格。同時(shí),建議在柱前連接在線過濾器,以過濾流動相中攜帶的顆粒以及泵和進(jìn)樣閥磨損后產(chǎn)生的顆粒物。
2、強(qiáng)吸附的小分子難以清洗下來,多次上樣后會在柱頭聚集,造成柱效降低和柱壓升高。特別是在處理食品、生物和環(huán)境樣品時(shí),色譜柱更容易受到損傷。因此,建議使用固相萃取(SPE)進(jìn)行樣品凈化,并安裝保護(hù)柱。
養(yǎng)成對反相液相色譜柱進(jìn)行效能測定的習(xí)慣,以便正確評估色譜柱的性能。
每個廠家的色譜柱出廠時(shí)都會提供一份柱效報(bào)告的譜圖,反映該色譜柱的性能。我們只需關(guān)注理論塔板數(shù)和拖尾因子。收到色譜柱后,建議先測量柱效(可以參考出廠報(bào)告上的方法),并保存譜圖,然后再進(jìn)行樣品分析。
在使用一段時(shí)間后,或者實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問題時(shí),可以更換一臺正常的液相色譜儀對色譜柱的柱效進(jìn)行檢測,并與之前保留的新柱柱效報(bào)告進(jìn)行對比。這種方法能夠排除液相儀、樣品等其他因素,有助于準(zhǔn)確判斷色譜柱是否合格。
在修復(fù)受損的色譜柱時(shí),柱效測試是判斷修復(fù)是否成功的重要指標(biāo)。而柱效測試所需的流動相非常簡單,能夠快速進(jìn)行驗(yàn)證。
此外,為了維持色譜柱的最佳性能,定期的維護(hù)和保養(yǎng)也是必不可少的。例如,使用適當(dāng)?shù)娜軇ιV柱進(jìn)行沖洗,可以有效去除殘留的樣品和污染物,延長色譜柱的使用壽命。在沖洗過程中,應(yīng)特別注意溶劑的兼容性和沖洗順序,避免對色譜柱造成不必要的損害。
同時(shí),對于長期不使用的色譜柱,應(yīng)妥善保存,避免暴露在極端溫度或濕度條件下。正確的保存方法能夠減少色譜柱的老化和性能下降,確保在下一次使用時(shí)仍能保持較高的分離效率和穩(wěn)定性。
總之,反相液相色譜柱的樣品預(yù)處理和維護(hù)保養(yǎng)是確保分析結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的重要環(huán)節(jié)。通過合理的預(yù)處理方法和科學(xué)的維護(hù)保養(yǎng)措施,我們能夠充分發(fā)揮色譜柱的性能潛力,為科研和生產(chǎn)提供更加準(zhǔn)確和可靠的數(shù)據(jù)支持。