在使用通用型反相色譜柱前,應對其性能進行測試,并將結(jié)果記錄保存,以便未來評估柱性能的變化。但需注意,柱性能可能因樣品、流動相、柱溫等條件的不同而有所差異。此外,進行柱性能測試時,應按照通用型反相色譜柱出廠報告中列出的條件進行(出廠測試所用的條件為*條件),這樣才能確保測得結(jié)果具有可比性。
通用反相色譜柱的安裝方法:
1、打開柱子包裝盒,檢查色譜柱的類型、尺寸、生產(chǎn)日期以及柱內(nèi)所存儲的溶劑。
2、將柱兩端接頭的密封堵頭擰下后,妥善放回包裝盒以備后用。
3、根據(jù)柱管上標示的流動相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥的出口連接(如果條件允許,建議在柱前使用保護柱);同時,將柱的出口與檢測器相連。連接管的外徑為1.57mm,內(nèi)徑為0.1-0.3mm,材質(zhì)為不銹鋼。連接管的兩端各配有空心螺釘和用于密封的壓環(huán)。在連接時,務必盡量減小柱外的死體積。連接管應通過空心螺釘和壓環(huán)插入至底部,然后順時針旋緊空心螺釘,直到無法繼續(xù)擰動為止,隨后用扳手再順時針擰動1/4至1/2圈,切忌用力過大。如果色譜柱在流動相加壓后出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,請繼續(xù)用扳手順時針擰動1/4圈,直至不再漏液為止。
完成連接后,進行系統(tǒng)的緊密度檢查至關(guān)重要。這通常涉及以較低的流速(如0.2-0.5mL/min)向色譜系統(tǒng)中泵入流動相,同時觀察整個系統(tǒng),包括連接處、色譜柱以及檢測器入口,確保無滲漏現(xiàn)象。若發(fā)現(xiàn)有漏液點,應立即停止泵流,仔細檢查并重新緊固相應部件,直至完全密封。
接下來,進行色譜柱的平衡。根據(jù)待分析樣品的特性,選擇合適的流動相組成和pH值,以恒定流速泵入系統(tǒng),讓流動相充分浸潤色譜柱,此過程一般需持續(xù)數(shù)小時,以確保柱內(nèi)達到穩(wěn)定的吸附-解吸平衡狀態(tài)。平衡時間的長短可能因柱型、柱溫及流動相特性而異。
平衡完成后,即可進行色譜柱的性能驗證。通過注入一系列已知濃度和性質(zhì)的標準品溶液,記錄色譜圖,評估柱效(如理論塔板數(shù))、分辨率、拖尾因子等關(guān)鍵指標,確保色譜柱滿足分析需求。若性能參數(shù)偏離預期,需重新檢查安裝步驟或調(diào)整操作條件,直至獲得滿意的分離效果。
至此,通用反相色譜柱的安裝與調(diào)試工作全部完成,它已準備好迎接日常分析任務,為科研或生產(chǎn)中的樣品分離與鑒定提供可靠支持。