在藥物研究與分析中，液相色譜儀常見的一些錯誤操作可能導致這臺昂貴的設備在使用不久后就出現(xiàn)故障。那么，在液相色譜分析實驗室中，哪些操作是不可以進行的呢？

1、流動相不經過過濾。

由于灰塵或其他雜質微?？赡軙χ?、密封圈、缸體和單向閥造成磨損，因此必須在使用前清除流動相中的所有固體微粒。最佳選擇是在玻璃容器中進行蒸餾，而常用的處理方法是過濾，可以使用0.2μm或0.45μm的濾膜等過濾器。泵的入口應連接砂濾棒或片。輸液泵的過濾器需要定期清洗或更換。

2、使用后未能及時清潔泵。

流動相中不應包含任何腐蝕性物質。含有緩沖液的流動相在停泵期間，特別是過夜或更長時間時，不應留存在泵內。如果將含緩沖液的流動相留在泵中，可能由于蒸發(fā)、泄漏或溶液靜置而析出微細鹽晶體，這些晶體會像前面提到的固體顆粒一樣損壞密封圈和柱塞等部件。

因此，必須先將泵用純水充分清洗，然后再更換為適合色譜柱保存并有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以使用甲醇或甲醇-水混合液）。

3、流動相走空

在使用泵時，必須注意確保溶劑瓶中的流動相不會耗盡，否則即使空轉泵也會對柱塞、缸體或密封環(huán)造成磨損，最終可能導致液體泄漏。

如果沒有流動相流出且沒有壓力指示，應該怎么辦？

可能是泵內積聚了大量氣體，此時可以打開泄壓閥，讓泵以較大的流量（例如5ml/min）運行，以排出氣泡。此外，可以使用一個50ml的針筒在泵的出口處輔助抽出氣體。另一個可能的原因是密封環(huán)磨損，需要進行更換。

4、壓力和流量變得不穩(wěn)定了嗎？

可能原因包括氣泡的存在，需要進行排查；或者單向閥內有雜物，可以將單向閥拆卸并浸泡在丙酮中進行超聲清洗。有時候，砂濾棒內可能會有氣泡，或者被細小的鹽晶體或滋生的微生物部分堵塞，此時可以將砂濾棒拆下，浸入流動相中進行超聲去氣泡處理，或用稀酸（如4mol/L硝酸）迅速去除微生物，或者溶解鹽后立即進行清洗。

5、壓力為何會出現(xiàn)過高或過低的情況呢？

可能是管道被堵，需要進行清理和清洗。壓力降低的原因可能是管道存在泄漏。在檢查堵塞或泄漏時，應逐段進行。進行梯度洗脫時，由于多種溶劑的混合及其成分的不斷變化，會帶來一些特殊問題，需予以充分重視：

在液相色譜中，對于組分復雜的樣品，通常采用梯度洗脫的方式。在同一次分析過程中，按照一定的程序持續(xù)調整流動相中各組分的濃度比例，這一過程稱為梯度洗脫。通過這種方法，可以使復雜樣品中性質差異較大的組分根據(jù)各自適合的容量因子k實現(xiàn)良好的分離。

PS：梯度洗脫的優(yōu)點包括：1. 縮短分析時間；2. 提高分離效果；3. 改善峰型，減少拖尾現(xiàn)象；4. 增強靈敏度。不過，有時可能會導致基線漂移。

6、梯度洗脫時流動相選擇不合適。

需要注意溶劑之間的相容性，不可將不互溶的溶劑用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在特定比例下可以相互混溶，但超過這個比例后則會出現(xiàn)不互溶的現(xiàn)象，因此在使用時需要格外留意。

當有機溶劑與緩沖液混合時，可能會出現(xiàn)鹽晶體析出，特別是在使用磷酸鹽時需特別謹慎。

7、忽視的空白梯度洗脫

梯度洗脫所用溶劑的純度要求較高，以確保良好的重現(xiàn)性。在進行樣品分析之前，需要進行空白梯度洗脫，以識別溶劑中的雜質峰。因為在弱溶劑中，雜質會在色譜柱的前端富集，之后會被強溶劑洗脫出來。此外，梯度洗脫所使用的溶劑應進行脫氣，以防在混合時產生氣泡。

8、忽略了溶劑混合引起的粘度變化。

混合溶劑的粘度通常會隨其組成變化，因此在梯度洗脫時常會出現(xiàn)壓力波動。例如，甲醇和水的粘度都較低，但當兩者以相似比例混合時，粘度會顯著增加，此時的柱壓大約是單獨使用甲醇或水時的兩倍。因此，在進行梯度洗脫時，應注意避免壓力超過輸液泵或色譜柱的最大承受限度。

9、色譜柱的存儲與保養(yǎng)不當。色譜柱是液相色譜儀的心臟，其性能直接影響分析結果。長時間不使用時，應將色譜柱保存在適當?shù)娜軇┲?，通常是甲醇或乙腈，以防柱子干涸和微生物生長。同時，避免頻繁的柱溫驟變，以免損害柱效。

10、檢測器維護不足。紫外檢測器或熒光檢測器等需定期清潔光窗，以防灰塵或殘留物影響信號強度。同時，檢查光源是否老化，確保檢測靈敏度。對于質譜檢測器，還需關注離子源的清潔和參數(shù)優(yōu)化。

11、數(shù)據(jù)處理與報告不規(guī)范。數(shù)據(jù)記錄應詳盡，包括儀器參數(shù)、樣品信息、數(shù)據(jù)處理步驟等，便于結果追溯和質量控制。報告編寫應遵循相關標準，確保數(shù)據(jù)的準確性和可比性。

總之，液相色譜儀的正確操作與維護是藥物研究與分析中不可或缺的一環(huán)。通過避免上述錯誤操作，結合嚴謹?shù)膶嶒炘O計和數(shù)據(jù)處理，可以顯著提高分析效率和結果的準確性，為藥物研發(fā)提供有力支持。因此，建議實驗人員不斷學習和實踐，以全面掌握液相色譜儀的操作技巧和維護知識。