關于手性化合物、手性分析、手性填料和手性柱，現(xiàn)在的理論很多，講的也比較復雜，我看了很多也不是特別明白，做分析三年多，分過的手性化合物最少也有幾千種，拿到手里的消旋體幾乎沒有分不開的，沒用到什么理論，主要都是經(jīng)驗，這里還是揀最實用的來講。

　　手性分析可以使用普通的色譜柱，需要流動相中添加手性分離試劑，也可以直接用固定相為手性填料的手性色譜柱，前者使用較少，大家更多的是使用商品化的手性色譜柱。

　　手性分析包括氣相和液相兩種，這個主要和樣品的物理性質(zhì)有關系，現(xiàn)在的手性化合物絕大多數(shù)都不能做氣相，所以氣相手性色譜柱無論從數(shù)量還是質(zhì)量上來講都不能與液相手性色譜柱相提并論。

　　一、手性柱

　　手性分離最重要的是選擇一根好的手性柱，說到手性柱就不得不提大賽璐，做手性分析的都知道，大賽璐的手性柱目前市場占有率最高，大家最熟悉的可能是OD-H，很多文獻中都有報導。大賽璐公司最初有四種填料，結構類似，對應的色譜柱分別是OD、AD、OJ和AS，粒徑10um，后來填料粒徑變?yōu)?um，就是賣的最多、使用范圍最廣的柱子，號稱四大金剛，分別是OD-H、AD-H、OJ-H和AS-H，在柱子名稱后邊加“-H”，意思應該是高效，這些柱子都只能做正相使用，為了在反相色譜中使用開發(fā)的柱子在相應的色譜柱名稱中添加了一個“R”。

　　上述色譜柱都屬于涂覆型填料，不耐溶劑，使用起來受樣品溶解性的限制，最近又開發(fā)了鍵合相手性柱，可以使用幾乎所有的常見溶劑做流動相，新的溶劑還提供了新的選擇性，進而提升了色譜柱的分離能力，主要是IA、IB和IC，其中IA對應AD-H，IB對應OD-H，IC是新開發(fā)的填料。和反相柱的發(fā)展趨勢一樣，大賽璐的手性柱也通過減小粒徑來獲得更高的柱效，最新的手性柱填料粒徑是3um。另外大賽璐還有其它一些手性色譜柱，但是遠不及上述幾種。

　　二、樣品前處理

　　說到手性分析，樣品的前處理非常重要。首先是消旋體樣品的普通液相純度問題，樣品的純度低了，看到手性柱上分離開的幾個峰讓人無從判斷究竟對映異構體有沒有分離開，分離開的幾個峰哪個是雜質(zhì)峰哪個是對映異構體的峰，所以樣品的純度要盡量的高，一般我們的要求是樣品的純度能達到90%以上，純度低的樣品需要做進一步的純化。

　　關于對映異構體峰的判斷，現(xiàn)在比較好的手段是使用旋光檢測器，在色譜圖上可以直接看到分離開的兩峰吸收一正一負，再有就是使用DAD檢測器，通過看兩峰的紫外吸收是否一致來做判斷。樣品前處理的另外一項是稀釋問題，這個問題最容易被忽視，處理不好會直接導致實驗失敗。我們都知道反相樣品稀釋的時候需要盡量使用流動相做稀釋劑，且稀釋劑里水含量要盡量高一些，這個要求對于手性分析同樣適用，正相的手性分析要求樣品稀釋溶劑盡量要求，就要犧牲手性柱壽命來換分離。

　　很多時候我們拿到手的樣品比較難溶，畢竟乙醇和異丙醇不是非常好的溶劑，即便是二氯甲烷、四氫呋喃、DMF或者DMAC也會遇到溶解性比較差的樣品，通常此類樣品分子式都相對比較復雜，分子量偏大，結構中含有帶N的顯堿性基團和顯酸性基團，此類樣品可以通過稀釋樣品時加酸或者堿來促進其溶解，但是加入的酸或堿含量不宜太高，濃度不宜過大。

　　很多化合物為了增加其穩(wěn)定性，都要做成鹽來保存和轉移，常見的包括鹽酸鹽、三氟乙酸鹽、甲基磺酸鹽、酒石酸鹽以及其它更復雜的鹽，這些鹽類也是可以直接拿來做手性分析的，無論是正相還是反相都可以，只要樣品能用合適的稀釋劑溶解，當然樣品游離出來做手性分析會更好。

　　再有就是很多樣品因為液相沒有紫外吸收、氣相不能氣化而不能直接做手性分析，這時就要衍生，衍生最多的樣品可能就是氨基酸了。氨基酸衍生方法可以是給氨基上衍生CBZ做液相，或者是用HCl(HBr)的乙醇(甲醇、異丙醇)溶液加三氟乙酸酐將羧基衍生成酯，氨基衍生成酰胺來做氣相。

　　最近比較流行的氨基酸衍生方法是用苯異硫氰酸酯(也叫異硫氰酸苯酯)衍生氨基來做手性分析，此方法當然也可以用來做普通的氨基酸液相純度分析，這個衍生方法要求化合物分子結構中的N原子上至少連接有一個H，所以只要是分子結構中含有帶有至少一個H原子的N結構，化合物都可以用此方法衍生。需要指出的是，做手性分析的原則是能不衍生就不衍生，因為衍生有可能會引起樣品手性純度下降，即消旋。

　　總結一下，手性分析中使用的消旋體純度一定要好，最好能配合DAD檢測器或者是旋光檢測器來做分析方法開發(fā)。樣品在稀釋時盡量用流動相相同種類的溶劑做稀釋劑，稀釋劑中醇類的含量不宜超過流動相中醇類的含量，難溶的樣品盡量不要用其它的溶劑，一方面可能會傷害柱子，另一方面容易導致峰形變差，但實際操作過程中很多時候為了達到分析目的，還不得不犧牲柱子的壽命，而且即便是使用純的乙醇或者是異丙醇做稀釋劑也不是不可以，只要是稀釋劑和流動相能夠互溶就行。