凝膠層析技術(shù)中的主要部件是層析柱,通常采用玻璃管或有機玻璃制成。分離柱的直徑大小對分離效果沒有影響,若需要使用大樣品量,則可以增加分離柱的直徑。通常用于制備的凝膠柱直徑大于2厘米,在加樣時需確保樣品均勻分布在凝膠柱表面。此外,隨著直徑增大,洗脫液量也會增加,導(dǎo)致樣品被稀釋。
玻璃層析柱的開口較大,加料速度快,無需其他儀器協(xié)助,頂部可與其他標(biāo)準(zhǔn)口玻璃器皿連接,但測量不便,底部容易殘留液體,層析速度慢且精確度不高,通常用于實驗的精度要求較低的情況。
增加壓力的柱層析,兩端通常采用4F材料,具有耐腐蝕性和耐酸堿性,中間部分有玻璃或有機玻璃材料,需要與蠕動泵結(jié)合,以加快層析速度,通過泵將樣品注入柱中,若沒有泵則會變得困難。目前一般實驗室都在使用增壓層析柱,在淘寶上也有售。
層析柱和色譜柱沒有任何不同。
有色譜帶的叫作色譜,準(zhǔn)確來說應(yīng)該稱為層析柱,因為現(xiàn)在色帶是無色的,但人們習(xí)慣稱之為色譜柱。
層析柱和色譜柱要說有區(qū)別的話,主要是色譜柱只能在色譜儀中使用,而層析柱并不局限于色譜儀的使用。例如溶劑洗脫的柱層析所用的層析柱一般不稱為色譜柱。
層析柱和液相柱之間的不同點
1、壓力
液相色譜柱(特別是分析性液相色譜):通常承受較高的壓力,一般在10-20Mpa。
層析柱通常在常壓下運行,或者使用真空泵(約0.1Mpa)。
2、填料
液相色譜柱:顆粒尺寸較?。ㄍǔ?-20um)。
柱層分析:粒徑較大。
3、分離度
粒徑越小,單位長度下理論塔板數(shù)越高,這是由第二項決定的。
液相色譜柱的分離能力優(yōu)于層析柱。
4、效率
液相色譜柱:具有快速分離速度,通常可在一小時內(nèi)完成。
層析柱:分離時間較長,需超過一個小時。